Wir bieten KcsA, Kanal des Kaliumkanals K von Streptomyces A, Ionenkanal, das zellfreie Protein an, das durch die nanodiscs lokalisiert wird, basiert auf E.coli-lysates für zellfreien Ausdruck.

Unser ZELLFREIES Protein ist die verificated Funktion gewesen.

Einleitung

KcsA (k-Kanal von Streptomyces A) ist ein prokaryotic Kaliumkanal von den Bodenbakterien Streptomyces lividans, der weitgehend in der Ionenkanalforschung studiert worden ist. Das pH aktivierte Protein besitzt zwei Transmembranesegmente und eine in hohem Grade selektive Porenregion, die für das Mit einem Gatter versehen und das Hin- und herfahren von K ⁺ Ionen aus der Zelle heraus verantwortlich ist. Die Aminosäurereihenfolge, die im Selektivitätsfilter von KcsA gefunden wird, wird in hohem Grade unter prokaryotic und eukaryotic k- ⁺ Spannungskanäle konserviert; infolgedessen hat eine Forschung auf dem Gebiet eines KcsA wichtigen strukturellen und mechanistischen Einblick auf der molekularen Basis für K ⁺ Ionenauswahl und -leitung zur Verfügung gestellt. Als einer der studierten Ionenkanäle bis heute, ist- KcsA eine Schablone für Forschung auf k- ⁺ Kanalfunktion und seine aufgeklärte Struktur liegt dem Computermodellieren der Kanaldynamik für die prokaryotic und eukaryotic Spezies zugrunde.

Funktion

Den KcsA-Kanal gilt als einen vorbildlichen Kanal, weil die KcsA-Struktur einen Rahmen für das Verständnis k- ⁺ Kanalleitung zur Verfügung stellt, die drei Teile hat: Kaliumselektivität, Kanal, der durch pH-Empfindlichkeit mit einem Gatter versehen, und Spannung-mit einem Gatter versehene Kanalinaktivierung. K- ⁺ Ionendurchdringung tritt an der oberen Selektivitätsfilterregion der Pore, während mit einem Gatter versehende Aufstiege pH vom protonation von Transmembranehelixen am Ende der Pore auf. Mit niedrigem pH protonated der M2-Helix und verschiebt den Ionenkanal von geschlossenem, um Anpassung zu öffnen. Da Ionen den Kanal durchfließen, werden mit einem Gatter versehende Mechanismen der Spannung gedacht, um Interaktionen zwischen Glu71 und Asp80 im Selektivitätsfilter zu verursachen, die die leitfähige Anpassung entstabilisieren und Eintritt in einen langlebigen nicht leitenden Zustand erleichtern, der der C-Art-Inaktivierung von Spannung-abhängigen Kanälen ähnelt.

In der nicht leitenden Anpassung von KcsA bei pH 7, wird K ⁺ fest zu Koordinierungssauerstoff des Selektivitätsfilters gesprungen und die vier Helixe TM2 laufen nahe der zellplasmatischen Kreuzung zusammen, um den Durchgang aller möglicher Kaliumionen zu blockieren. Bei pH 4 jedoch, macht KcsA des Austausch-Filters des Millisekundezeitraums angleichbare Durchdringungsund nonpermeating Zustände und zwischen den offenen und geschlossenen Anpassungen der M2-Helixe durch. Während diese eindeutigen angleichbaren Änderungen in den unterschiedlichen Regionen des Kanals eintreten, wird das molekulare Verhalten jeder Region durch beide elektrostatischen Interaktionen und Allostery verbunden. Die Dynamik von diesem stereochemical Konfigurationen des Austausches im Filter bietet die körperliche Basis für simultanes K ⁺ Leitfähigkeit und Mit einem Gatter versehen.

Struktur

Mit dem Auftauchen der Kristallstruktur (0,32 Nanometer) des bakteriellen (Streptomyces lividans) Kaliumkanals KcsA, ist ein Fundament für Ionenkanalstruktur geliefert worden. Seine Topologie ist identifiziert worden, um mit einem inneren und äußeren Helix bitopic zu sein. Die zwei Helixe werden durch den „Porenhelix“ und den Selektivitätsfilter verbunden. Vier Untereinheiten bilden den Kanal, indem sie eine Bahn zeichnen, damit Ionen die Doppelschicht kreuzen. Der Durchgang eines Ions kann als Führen eines Tors auf der zellplasmatischen Seite und Bewegen in ein Vestibül beschrieben werden, das das Ion über den Dipolmoment eines so genannten inneren Helixes stabilisiert. Die Ionen müssen den Selektivitätsordner in einer beratenen Bewegung mit den Kaliumionen bereits führen, die bereits innerhalb des Filters gelegen sind. Mit seiner hohen Selektivität zeigt KcsA Ähnlichkeit mit Spannung-mit einem Gatter versehenen k-Kanälen (KV) im Hinblick auf Ionendurchdringung und Ähnlichkeit in der Topologie mit dem Inneren, das k-Kanäle korrigiert. Wichtig ist zu merken, dass KcsA-Kanäle durch pH-Veränderungen ausgelöst werden. Die Ursache der enormen Selektivität von k-Kanälen für Kalium über Natrium zu dechiffrieren ist eine aktuelle Herausforderung. Es wird vorweggenommen, dass die Struktur von KcsA ein geschlossenes Stadium darstellt. Mit der Struktur (0,33 Nanometer) von prokaryotic (Methanobacterium-thermoautotrophicum). Während der Aktivierung drücken die inneren Helixe radialäußerliches und öffnen die Zusammenziehung an der zellplasmatischen Seite. Diese Öffnung wird von einem Scharnier um einen Glycinrückstand in Position 99 (G99) begleitet. Dieses ist die ausgeprägteste angleichbare Änderung, die bis jetzt für Ionenkanäle beschrieben wird. Der Selektivitätsfilter bleibt unverändert in seiner strukturellen Position und der äußere Helix macht nur begrenzte angleichbare Änderungen durch. Als Schlussfolgerung für den Zusammenhang dieses Berichts und in Bezug auf die Ergebnisse für Vpu in Bezug auf ein KcsA.

Vorteil von Escherichia- Colisystem

1. Proteinreicher Ertrag
2. Einfache Bearbeitung und schnelles Zellwachstum und lysate Vorbereitung
3. Wirtschaftlich
4. Einfaches Gentechnik
5. Gut eingerichtet